Magyar

  vissza

Multikolor zebradánió alapú tesztrendszer létrehozása toxikológiai vizsgálatokhoz

Azonosítója: NNF 78834

Jellege: OTKA-Norvég Finanszírozási Mechanizmus kutatási pályázat

Témavezető: Dr. Urbányi Béla egyetemi docens, tanszékvezető

Elnyert támogatás: 22.350.000 Ft

Futamidő: 2009-2011.

 

A projekt átfogó célja:

A toxikológia és a farmakológia területén egyre nagyobb igény mutatkozik a környezetbe juttatott szennyezőanyagok kisebb dózisban történő kimutatására alkalmas, az emlős állatkísérleteket kiváltó tesztrendszerek iránt.

A zebradánió (Danio rerio) széleskörűen vizsgált modellállat, genetikai és fejlődésbiológiai szempontból a legjobban ismert halfaj. A zebradánió embriók átlátszóak, ezért a fluoreszcens fehérjékkel létrehozott transzgenikus vonalak jól használhatók a toxikus anyagok fejlődésre gyakorolt hatásainak vizsgálatára. Ha a toxikológiai és farmakológiai szempontból fontos szövetekben és szervekben (máj, ér, idegszövet) más-más színű fluoreszcens fehérjét termel, lehetőség nyílik a szennyezőanyagok ezen szervekre kifejtett hatásainak in vivo nyomon követésére egyetlen vonal segítségével. A pályázatban olyan, a fenti igényeket kielégítő, többszínű transzgenikus vonal létrehozását vállaltuk, amely gyors, tömeges vizsgálatokat tesz lehetővé.

 

A SzIE, MKK-KTI, Halgazdálkodási Tanszék feladatai a projekten belül:

A vonal létrehozása során már rendelkezésünkre álló, ér- és idegszövetben specifikusan zöld (GFP) és vörös (DsRed) fluoreszcens fehérjéket termelő transzgenikus vonalakból indultunk ki és megkezdtük egy új, májspecifikusan fluoreszcens fehérjét kifejező transzgenikus vonal létrehozását.

Az új vonal létrehozásához Tol2 transzpozon alapú, Gateway klónozó rendszerrel hoztunk létre génkonstrukciókat. A májban specifikusan kifejeződő gének közül a vitellogenin-1 gént választottuk, mivel annak promóter régiója ösztrogén hatású anyagokkal indukálható, ezért így a szennyezőanyagok hatásainak vizsgálatán kívül ösztrogén hatású anyagok kimutatására is alkalmas transzgenikus vonal fejleszthető ki. A konstrukcióba a vitellogenin promóter mellett vörös, vagy kék fluoreszcens fehérje (mCherry, BFP) génjét építettünk be.

A vonalak keresztezésével a későbbiek során olyan többszörösen transzgenikus zebradánió vonalak hozhatók létre, amelyek lehetővé teszik a szennyezőanyagok idegszövet fejlődésre, vérsejt képzésre és májra gyakorolt káros hatásainak in vivo detektálását és követését egyazon tesztrendszerben.

A pályázatból egy mikroinjektáló berendezést illetve egy inkubátort szereztünk be, amelyek nagymértékbe elősegítik a tanszék zebradániós laboratóriumának munkáját, a szolgáltatási hátterünk erősítését. A berendezéseket diplomaterves hallgatóink is rendszeresen felhasználják dolgozatuk kísérletes munkáinak elvégzésekor.

 

 

 

vissza...